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    蛋白雙向 電泳實驗服務
    蛋白雙向 電泳實驗服務
    更新時間:2021-02-19
    訪問量: 549
    廠商性質: 生產廠家

    蛋白雙向 電泳實驗服務
    提供商: 上海研謹生物
    服務名稱: 蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務
    規格: 實驗服務
    價格: 500元
    收費標準/服務周期/提供結果:
    歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
    更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!

    蛋白雙向 電泳實驗服務產品概述:

     

    一、蛋白雙向 電泳實驗服務實驗技術簡介

    2D-WB是雙向電泳與傳統western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術,可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

    二、蛋白雙向 電泳實驗服務概述

    2D-WB是雙向電泳與傳統western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術,可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

    三、服務內容

    1、蛋白質抽提與定量;

    2、雙向電泳;

    3、轉膜,封閉,孵育,顯示成像。

    四、實驗操作流程

    1、第--項電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

    2、第二項電泳結束后,取出凝膠進行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

    3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

    4、一抗孵育,根據抗體說明書選擇孵育時間,常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一抗孵育后取出膜

    TBST洗滌3次,每次5分鐘。

    5、二抗孵育:根據一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

    6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混臺均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影,直到出現清晰的蛋白質條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜臺考慮蛋白質的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

    7、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

    送樣須知,為了保證2D Western blot技術服務能順利進行,樣品寄送需滿足以下要求:

    1、顧客提供:組織、細胞、蛋白質溶液等; 一抗(可交由研謹公司代購)。

    2、運輸要求:干冰或液氮包裝寄送。

    注:樣本應避免各類污染和反復凍融。

    五、技術服務報告內容

    1、蛋白質定量結果及電泳上樣量;

    2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果;

    3、2D Western blot完整的實驗報告,包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。

    附: 2D Western blot實驗步驟

    1、2D Western blot蛋白質樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質,破壞蛋白質與蛋白質間的相互作用,避免各類干擾物質,樣品制備與IEF兼容等。

    2、雙向電泳的主要步驟,第-項電(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

    3、第二項電泳結束后,取出凝膠進行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

    4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

    5、-抗孵育,根據抗體說明書選擇孵育時間,常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

    6、二抗孵育:根據-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

    7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影,直到出現清晰的蛋白質條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜合考慮蛋白質的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

    8、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

     

    實驗代做服務:

     

    免疫組化IHC染色實驗服務

    細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

    試劑盒免費代檢測

    實驗室代做實驗項目

     

    透射電鏡服務實驗服務

    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

    核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實驗服務

    免疫共沉淀(CHIRP)實驗

    RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

    酶聯免疫(ELISA)技術服務

    雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

    喹諾酮類快速檢測試劑盒

    組織芯片/微陣列定制技術服務

     

    染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

     

    多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

    免疫細胞化學ICC實驗服務

    ATP/ADP檢測實驗服務

    蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

    蛋白相互作用分析

    堿性磷酸酶染色實驗服務

    PKC活性檢測實驗

    非標定量實驗

    (Label-free)

     

    DIGE技術實驗服務

    端粒酶活性檢測實驗

    細胞生長曲線的測定

    掃描電鏡服務

    NF-KB p65活性檢測實驗

     

    慢病毒包裝實驗服務

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