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    總抗氧化能力試劑盒說明書可見分光光度法
    總抗氧化能力試劑盒說明書可見分光光度法
    更新時間:2019-04-18
    訪問量: 341
    廠商性質: 生產廠家

    總抗氧化能力試劑盒測定原理
    在酸性環境下,物質還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其總抗氧化能力。

    總抗氧化能力試劑盒說明書可見分光光度法產品概述:

    貨號:YC2306                                                 規格:50管/48樣

    總抗氧化能力(Total antioxidant capacity ,T-AOC)

    試劑盒說明書

    可見分光光度法

    注意:正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

    測定意義

    測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液

    及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

    測定原理

    在酸性環境下,物質還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其總抗氧化能力。

    自備實驗用品

    可見分光光度計、恒溫水浴鍋、低溫離心機、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

    試劑組成和配制

    提取液:液體 60mL×1 瓶,使用前預冷。

    試劑一:液體 50mL×1 瓶,避光保存。

    試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

    試劑三:液體 5mL×1 瓶,避光保存。

    樣品的制備

    (1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品

    血漿(制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 離心10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超30 d)后再測定。

    (2) 組織樣品

    按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    (3) 細胞樣品

    按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入1mL 提取液),冰浴超聲波破碎(功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    操作步驟

    混合液(現配現用):將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合,使用前預溫至 37℃ 。

     

    空白管

    測定管

    混合液(μL)

    900

    900

    樣品(μL)

     

    30

    雙蒸水(μL)

    120

    90

    充分混勻,反應10min,雙蒸水調零,1mL玻璃比色皿,測定593nm處吸光值,△A= A測定

    -A空白

    注意:空白管只需測定一次。

    總抗氧化能力計算

    1. 定義:樣品的抗氧化能力以達到同樣吸光度變化值(△A)所需的標準液離子濃度表示。

    標準曲線為 y=0.6308 x +0.1291,R2=0.9989

    2. 計算公式:

    (1)按蛋白濃度計算

    總抗氧化能力(U/mg prot)=1÷0.6308×(△ A-0.1291)× V 反總÷(V 樣× Cpr)

    =53.9×(△ A-0.1291)÷ Cpr

    (2)按樣品質量計算

    總抗氧化能力(U/g)=1÷0.6308×(△ A-0.1291)× V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

    =53.9×(△ A-0.1291)÷ W

    (3)按細胞數量計算

    總抗氧化能力(U/104 cell)=1÷0.6308×(△A-0.1291)×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數量(萬個)= 53.9×(△A-0.1291)÷ 細胞數量(萬個)

    (4)按液體體積計算

    總抗氧化能力(U/mL)=1÷0.6308×(△A-0.1291)× V 反總÷V 樣

    =53.9×(△A-0.1291)÷ Cpr

    V 樣總:加入提取液體積,1 mL; V 反總:反應總體積,1.02mL;V 樣:反應中樣品體積,

    0.03mL;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL

    注意事項

    1. 試劑二對人體有刺激性,請采取適當的防護措施。為了您的安全和健康,請穿實驗服并

    戴乳膠手套操作。

    2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑,否則對本試劑盒的檢測結果產生

    干擾。

    3. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反

    應的還原劑。

    4. 如果樣品測定出來的吸光值在標準曲線范圍以外,需把樣品適當稀釋或濃縮后再進行測

    定。

    5. 試劑盒 2-8℃保存。

     

    糖原含量說明書

    ca ++ mg ++ - atp 酶活性測定說明書

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