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    總抗氧化能力試劑盒說明書
    總抗氧化能力試劑盒說明書
    更新時間:2019-04-18
    訪問量: 784
    廠商性質: 生產廠家

    總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)試劑盒測定原理:
    在酸性環境下,還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

    總抗氧化能力試劑盒說明書產品概述:

    貨號:YC1205                                                   規格:100管/96樣

     

    總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)試劑盒說明書

    微量法

     

    注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

    研究意義:

    測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

    測定原理:

    在酸性環境下,還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

    自備實驗用品:

    恒溫水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

    試劑組成和配制:

    提取液:液體 100mL×1 瓶,使用前預冷。

    試劑一:液體 15mL×1 瓶,避光保存。

    試劑二:液體 1.5mL×1 瓶,4℃避光保存。

    試劑三:液體 1.5mL×1 瓶,避光保存。

    混合液(現配現用):將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合,使用前37℃預溫。

    樣品的制備:

    (1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

    血漿(制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用EDTA抗凝)4℃,5000rpm 離心10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超30d)后再測定。

    (2) 組織樣品

    按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    (3) 細胞樣品

    按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    操作步驟:

    1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至593nm,蒸餾水調零。

     

     

     

     

     

    2、操作表

     

    空白管

    測定管

    混合液(μL)

    180

    180

    樣品(μL)

     

    6

    雙蒸水(μL)

    24

    18

    充分混勻,反應10min,于微量石英比色皿/96孔板,測定593nm吸光值,△A= A測定-A空白

    注意:空白管只需測定一次。

    總抗氧化能力計算公式:

    a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

    標準曲線:y=0.6308x+0.1291,R2=0.9989

    (1)按樣本質量計算

    總抗氧化能力(U/g)=(△A-0.1291)÷ 0.6308×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

    =53.9×(△A-0.1291)÷W

    (2)按樣本蛋白濃度計算

    總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A-0.1291)÷0.6308×V 反總÷(V 樣×Cpr)

    =53.9×(△A-0.1291)÷Cpr

    (3)按細胞計算

    總抗氧化能力(U/104cell)=(△A-0.1291)÷0.6308×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量(萬個)= 53.9×(△A-0.1291)÷ 細胞數量(萬個)

    (4)按液體體積計算

    總抗氧化能力(U/mL)=(△A-0.1291)÷0.6308×V 反總÷V 樣= 53.9×(△A-0.1291)

    V 樣總:加入提取液體積,1 mL; V 反總:反應總體積,204μL;V 樣:反應中樣品體積,

    6μL;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL

    b.用 96 孔板測定的計算公式如下

    標準曲線:y=0.3154x+0.1291;R2=0.9989

    (1)按樣本質量計算

    總抗氧化能力(U/g)=(△A-0.1291)÷0.3154×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

    =107.8×(△A-0.1291)÷W

    (2)按樣本蛋白濃度計算

    總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A-0.1291)÷0.3154×V 反總÷(V 樣×Cpr)

    =107.8×(△A-0.1291)÷Cpr

    (3) 按細胞計算

    總抗氧化能力(U/104cell)=(△A-0.1291)÷0.3154×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量(萬個)= 107.8×(△A-0.1291)÷ 細胞數量(萬個)

    (4)按液體體積計算

    總抗氧化能力(U/mL)=(△A-0.1291)÷0.3154×V 反總÷V 樣= 107.8×(△A-0.1291)

    V 樣總:加入提取液體積,1 mL; V 反總:反應總體積,204μL;V 樣:反應中樣品體積,

    6μL;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL

     

     

    注意事項:

    1. 試劑二對人體有刺激性,請采取適當的防護措施。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴乳膠手套操作。

    2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑,否則對本試劑盒的檢測結果產生干擾。

    3. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應的還原劑。

    4. 如果樣品測定出來的吸光值在標準曲線范圍以外,需把樣品適當稀釋或濃縮后再進行測定。

    5. 試劑盒 2-8℃保存。

     

    微量葡萄糖含量試劑盒說明書(測組織、細菌或細胞)

    ca++ mg++- atp 酶活性測定說明書

     

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