<big id="cl29u"><nobr id="cl29u"></nobr></big>

  • <big id="cl29u"><em id="cl29u"></em></big>
    <code id="cl29u"><nobr id="cl29u"><sub id="cl29u"></sub></nobr></code>

  • <code id="cl29u"><small id="cl29u"><track id="cl29u"></track></small></code>

  • <code id="cl29u"><nobr id="cl29u"><track id="cl29u"></track></nobr></code>

  • <center id="cl29u"></center>
  • 當前位置:
    首頁 > 產品中心 > 分子生物學產品 > 其他 > Ca++ Mg++-ATP 酶活性測定微量法說明書
    產品展示Products
    Ca++ Mg++-ATP 酶活性測定微量法說明書
    Ca++ Mg++-ATP 酶活性測定微量法說明書
    更新時間:2019-04-18
    訪問量: 500
    廠商性質: 生產廠家

    Ca++ Mg++-ATP 酶活性測定微量法說明書
    測定意義:
    Ca++ Mg++-ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP水解生成ADP和無機磷。

    Ca++ Mg++-ATP 酶活性測定微量法說明書產品概述:

    貨號:YJ1174                                                   規格:100管/48樣

    Ca++ Mg++-ATP 酶活性測定說明書

    微量法

    正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

    測定意義:

    Ca++ Mg++-ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP水解生成ADP和無機磷。

    測定原理:

    根據Ca++ Mg++ -ATP 酶分解ATP生成ADP及無機磷,通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。

    需自備的儀器及用品:

    可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

    試劑的組成和配制:

    提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入6mL蒸餾水充分混勻待用;用不完的試劑 4℃保存一周;

    試劑三:液體 2mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存。用時加入3mL蒸餾水, 4℃保存。

    試劑五:粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入25mL蒸餾水,溶解后 4℃保存一周。

    試劑六:粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入25mL蒸餾水,溶解后 4℃保存一周。

    試劑七:液體25mL×1 瓶,室溫保存。

    試劑八:10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。

    0.5μmol/mL標準磷應用液配制:將試劑八20倍稀釋,即取0.1mL試劑八加1.9mL蒸餾水充分混勻。

    定磷劑的配制:按 H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現用現配。

    注意:配試劑建議用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

    樣品酶液的制備:

    1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

    細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    2、血清(漿)樣品:直接檢測。

    操作步驟:

    1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 660nm,蒸餾水調零。

    2、酶促反應(在 EP 管中加入下列試劑)

     

    對照管

    測定管

    試劑一(μL)

    65

    45

    試劑二(μL)

    60

    60

    試劑三(μL)

     

    20

    樣本 (μL)

     

    100

    混勻,37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)準確水浴 10min

    試劑四(μL)

    25

    25

    樣本 (μL)

    100

     

    混勻,8000g,25℃離心 10min,取上清液

    3、定磷(在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑)

     

    空白管

    標準管

    對照管

    測定管

    0.5μmol/ml標準磷應用液(μL)

     

    20

     

     

    上清液(μL)

     

     

    20

    20

    蒸餾水(μL)

    20

     

     

     

    定磷試劑(μL)

    200

    200

    200

    200

    混勻,室溫放置30min,在660nm處,記錄各管吸光值。

    注意事項:

    1、由于每一個樣都必須做對照,本試劑盒100管只能測48份 Ca++ Mg++-ATP酶。

    2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。避免磷污染是

    檢測成敗的關鍵。

    3、空白管和標準管只要做一管。

    Ca++ Mg++-ATPase 活力的計算:

    1、血清(漿)Ca++ Mg++-ATPase 活力的計算:

    定義:每小時每毫升血清(漿)中Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP產1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。

    Ca++ Mg++-ATP 酶活力(μmol/h/mL)= [C 標準管×V 總]×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷V 樣÷T=7.5×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)

    2、組織、細菌或細胞中Ca++ Mg++-ATPase 活力的計算:

    (1)按蛋白濃度計算:

    定義:每小時每毫克組織蛋白中Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。

    Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/mg prot)= [C標準管×V總]×(A測定管-A對照管)÷(A 標準管-A空白管)÷(V樣×Cpr)÷T =7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr

    (2)按樣本鮮重計算:

    定義:每小時每克組織中Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力

    單位。

    Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h/g 鮮重)=[C標準管×V總]×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(W× V樣÷V樣總)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W

    (3)按細菌或細胞密度計算:

    定義:每小時每1萬個細菌或細胞中Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。

    Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /104cell)= [C標準管×V總]×(A測定管-A對照管)÷(A 標準管-A空白管)÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.015×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)

    C 標準管:標準管濃度,0.5μmol/mL;V 總:酶促反應總體積,0.25mL;V 樣:加入樣本體

    積,0.1mL ;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,1/6 小時;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

     

    線粒體復合體ⅳ試劑盒說明書

    微量葡萄糖含量試劑盒說明書(測組織、細菌或細胞)

    留言框

    • 產品:

    • 您的單位:

    • 您的姓名:

    • 聯系電話:

    • 常用郵箱:

    • 省份:

    • 詳細地址:

    • 補充說明:

    • 驗證碼:

      請輸入計算結果(填寫阿拉伯數字),如:三加四=7
    聯系人
    在線客服
    用心服務成就您我
    最新国模无码国产在线视频_又爽又色又高潮的免费视频国产_少妇高潮牲交短视频_久久精品免费观看国产