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    葡萄糖含量試劑盒說明書(測組織、細菌)
    葡萄糖含量試劑盒說明書(測組織、細菌)
    更新時間:2019-04-18
    訪問量: 630
    廠商性質: 生產廠家

    葡萄糖含量試劑盒測定原理:
    葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化
    4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

    葡萄糖含量試劑盒說明書(測組織、細菌)產品概述:

    葡萄糖含量試劑盒說明書(測組織、細菌或細胞)

     

    分光光度法 50 管/48

    正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

    葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯yi能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。

    測定原理:

    葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化

    4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

    需自備的儀器和用品:

    可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水

    試劑的組成和配制:

    試劑一:0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 25ml×1 瓶,4℃保存;

    試劑三:液體 25ml×1 瓶,4℃保存;

    葡萄糖提?。?/span>

    1、組織的處理:按照組織質量g:蒸餾水體積(mL) 15~10 的比例建議稱取約 0.1g組織,加入 1mL 蒸餾水,研磨成勻漿,95℃水浴 10 分鐘蓋緊,防止水分散失,冷卻后, 8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。

    2、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量104 :蒸餾水體積mL 500~10001 的比例建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水,超聲波破碎細菌或細胞冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復 30 ,95℃水浴 10 分鐘蓋緊,防止水分散失,冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。

    測定步驟

    1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至505nm,蒸餾水調零。

    2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合,用多少配多少。

    3、加樣表 EP 管中加入下列試劑

    試劑(μL

    空白管

    標準管

    測定管

    樣本

     

     

    100

    試劑一

     

    100

     

    蒸餾水

    100

     

     

    混合試劑

    900

    900

    900

    混勻,置 37℃(哺乳動物25℃(其它物種水浴中,保溫 15min,于505nm 波長處讀取吸光度??瞻坠?、標準管和測定管吸光值分別記為A1、A2 A3??瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?。

    葡萄糖含量計算:

    1、按樣本蛋白濃度計算

    葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷Cpr。

    2、按樣本鮮重計算


     

    葡萄糖含量(µmol/g 鮮重)= (C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷W

    3、按細菌或細胞密度計算

    葡萄糖含量(µmol/ 104 cell)= (C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷ (A2-A1)

    C 標準:標準管濃度,0.5µmol/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL;

    Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

     

    注意:低檢測限為 50nmol/g 鮮重或 0.5nmol/mg prot

     

    糖原含量說明書

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