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    RT-PCR技術服務
    RT-PCR技術服務
    更新時間:2021-02-04
    訪問量: 1531
    廠商性質: 生產廠家

    RT-PCR技術服務
    1、引物設計合成(人、大鼠、小鼠、兔等)
    2、基因表達水平檢測、內參檢測
    3、SNP檢測服務
    4、甲基化檢測服務
    5、測序技術服務
    6、芯片檢測(全基因、MicroRNA)
    7、染色體分析

    RT-PCR技術服務產品概述:

    反轉錄PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一種從RNA擴增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對于獲得與克隆mRNA的5’、3’末端序列和從非常少量的mRNA樣品構建大容量的cDNA文庫方面都是極為靈敏與通用的方法。此外,RT-PCR還易于鑒定已轉錄序列是否發生突變及呈現多態性,還可用于測定基因表達的強度。我公司采用二步RT-PCR法,可滿足客戶不同的實驗要求。
    樣品要求:提供的樣品要新鮮并盡可能多,不推薦提供RNA樣品,或者提供cDNA,并盡可能詳細的提供背景資料(基因序列、Genebank accession number擴增產物的用途等)。


    RT-PCR技術服務?基本步驟:
    ● 模板制備:見RNA提取技術服務。
    ● 引物設計
        客戶提供上、下游引物,或者我公司提供免費的引物設計及合成(包括RT-PCR半定量檢測中的內參引物)。
    ● 反轉錄
    (1)Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。

     

     試劑名稱  使用量
     模板RNA  2μg
     Oligo(dT)12-18 Primer(50μM)  2.5μl

    (2)70℃保溫5分鐘后迅速在冰上急冷2分鐘以上。 
    (3)離心數秒鐘使模板RNA/引物的變性溶液聚集于Microtube管底部。 
    (4)在上述Microtube管中配制下列反轉錄反應液。

     

     試劑名稱  使用量
     上述模板RNA/引物變性溶液  
     5×M-MLV Buffer  5μl
     dNTP Mixture(各10 mM)  1.25μl
     RNase Inhibitor(40 U/μl )  25U
     M-MLV(200 U/μl )  200U 
     RNase free dH2O  up to 25μl

    42℃保溫1小時。 
    (5)70℃保溫15分鐘后冰上冷卻,得到cDNA溶液。
    若需要表達,參考基因表達服務。若需要進行RT-PCR半定量分析,接著以下的操作。
    ● RT-PCR半定量分析
    PCR擴增目的基因及看家基因,產物經過瓊脂糖凝膠電泳后進行灰度掃描分析。

    RNA模板的制備需另收費(見RNA提取服務)以上為1個目的基因的報價。進行相對定量分析時,同一材料的多個目的基因的價格=1個目的基因價格×目的基因個數。
    提供結果
    完整的實驗操作步驟、電泳圖、定量分析結果等。

    RT-PCR技術服務參照:

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