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    組織總磷含量測定試劑盒說明書

    提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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    貨號: YJS2421                                                   規格:50管/48樣

    組織總磷含量測定試劑盒說明書

    可見分光光度法

    注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

    測定意義:

    磷的存在形態包括無機磷與有機磷。無機磷主要指磷酸根,參與生物體內多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等。通過測定總磷與無機磷含量即可了解作物對磷的利用率,進而為合理施肥提供依據。

    測定原理:

    總磷經消化后,轉化成無機磷。鉬藍法是測定無機磷含量的經典方法,一定條件下,鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質,通過測定660nm光吸收,即可計算無機磷含量,進而可計算出組織中總磷含量。

    自備儀器和用品:

    可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1ml玻璃比色皿、蒸餾水和濃硫酸。

    試劑組成和配置:

    試劑一:液體×1 瓶,4℃保存) (強腐蝕性,強氧化性)。

    試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。

    試劑三:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入15mL蒸餾水,溶解后再加入10mL

    試劑二,混勻。

    標準品:液體×1 支,20μmol/L 無機磷標準液,-20℃保存。

    有機磷消化:

    取帶蓋試管,進入精確稱取的約0.1 g組織,加濃硫酸1.0 mL,蓋緊(防止水分散失)后沸水浴10min左右,待溶液呈黑色或棕色時取出。稍冷后,加試劑一200μL,充分混勻,蓋緊后繼續沸水浴,直到溶液呈透明狀,取出室溫冷卻后,加蒸餾水8.8mL,充分混勻;室溫,8000g,離心10min,取上清液待測。

    測定操作:

    1. 分光光度計預熱30min,調節波長到660nm,蒸餾水調零。

    2. 打開水浴鍋,調節溫度到40℃。

    3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10min后于660nm測定吸光度,記為A空白管。

    4. 標準管:取EP管,依次加入50μL標準液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10min后于660nm測定吸光度,記為A標準管。

    5. 測定管:取EP 管,依次加入50μL上清液,450μL 蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10min 后于660nm測定吸光度,記為A測定管。

    注意:空白管和標準管只需測定一次。

     

     

    組織總磷含量計算公式:

    1) 按照蛋白含量計算

    總磷含量(mmol/mg prot) = [C 標準液×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)]×V 總÷Cpr= 1×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W

    2) 按照樣本質量計算

    總磷含量(mmol/g )= [C 標準液×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)]×V 總÷W= 1×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W

    C 標準液:1 mmol/L;V 總:上清液總體積,10 mL=0.01 L;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;

    W:樣品質量,g。

    注意事項:

    1. 試劑三需臨用前配制,并且當天使用完畢。

    2. 40min內完成比色。

    3. 最DI檢出限為10μmol/L。

    實驗代做服務:

     


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