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    甲基化DNA檢測試劑盒說明書
    點擊次數:93 發布時間:2021-11-09

    甲基化DNA檢測試劑盒說明書

    DNA Methylation Kit

     

    目錄號:K2140

    保存:室溫

     

    組分說明

     

    Cat. No.                                            K2140                  K2140A

    Kit Size                                                 10                    50

    CT Conversion Reagent               10 reations              50 reations

    M-Dissolving Buffer             10 reations100 μl)  50 reations(粉末)

    M-Dilution Buffer                         400 μl               2 ml

    M-Buffer PA                               15 ml                60 ml

    M-Wash Bufferconcentrate)        2 ml             15 ml

    M-Elution Buffer                                 1 ml                 10 ml

    Buffer PS                                    5 ml                 15 ml

    Spin Column DS                             10                    50

    Collection Tube2ml)               10                50

     

    產品簡介

     

        本試劑盒采用高溫處理方法,縮短了轉變時間,提高了轉變效率,轉變效率可達到 99%以上。經過 DNA亞硫酸氫鹽轉變,可回收得到大量 DNA。本試劑盒基本原理為 DNA 經亞硫酸氫鈉處理后,可使未甲基化的胞嘧啶轉變為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。

     

        本試劑盒采用硅基質膜式純化柱通過簡單的結合-洗滌-洗脫步驟,可從甲基化修飾后的溶液中回收純化 DNA,回收的DNA 純度高,完整性好,可直接用于測序、甲基化 PCR 檢測、芯片分析、連接和轉化、酶切、標記、顯微注射、PCR 和體外轉錄等各種分子生物學實驗。

     

    注意事項

     

    1.   產品配用方法:

    110次包裝配制方法:CT Conversion Reagent是固體混合物,一定要在首次使用前制備好。將2 ml  無菌水、100μl M-Dissolving Buffer300  μl M-Dilution Buffer加入到CT Conversion Reagent管中。 在55°C溶解并震蕩直至全部溶解。在使用之前將 CT Conversion Reagent 溶液在室溫(20°C -30°C)下避光保存。每管的CT Conversion Reagent是針對10DNA 處理設計的,為了得到較好的結果, CT Conversion Reagent應當在制備后立即使用,如果不立即使用,可將CT Conversion Reagent  溶液在-20°C存儲1周,使用前,請務必將存儲的CT Conversion Reagent 溶液在室溫下解凍,并且通過振動或顛倒2分鐘以充分混勻,CT Conversion Reagent對光很敏感,所以要盡量減少在光下的暴露。

     

    250 次包裝配制方法:CT Conversion Reagent、M-Dissolving Buffer 均固體混合物,一定要在首次使用前制備好。將 5ml 無菌水加入到 M-Dissolving Buffer 中震蕩溶解,待固體全部溶解后將 M-Dissolving Buffer 管中溶液全部轉移至CT Conversion  Reagent 管中同時補加 5.5ml 無菌水。再將 1.5ml M-Dilution Buffer 加入到 CT Conversion  Reagent

    管中。在 55°C 溶解并震蕩直至全部溶解。在使用之前將 CT Conversion Reagent  溶液在室溫 (20°C -30°C)下避光保存。每管的  CT Conversion Reagent 是針對 50 DNA  處理設計的,為了得到較好的結果, CT Conversion Reagent 應當在制備后立即使用,如果不立即使用,可將  CT Conversion Reagent 溶液在-20°C 存儲 1 周,使用前,請務必將存儲的 CT Conversion Reagent 溶液在室溫下解凍,并且通過振動或顛倒 2 分鐘以充分混勻,CT Conversion Reagent 對光很敏感,所以要盡量減少在光下的暴露。

     

    2.  第一次使用前應安裝試劑瓶標簽的說明先在M-Wash Buffer中加入無水乙醇。

     

    自備試劑:無水乙醇、75%乙醇

     

    操作步驟

     

    每次制備的 DNA 范圍在  1 ng-4  μg 之間,最佳量為 500 ng-2μg。

    1. 20 μl DNA 樣品,加入到離心管(自備)中,如果樣品量不足,用水補至 20μl。

    2. DNA 樣品中加入 2.2 μl  M-Dilution Buffer,混勻樣品。

     

    3. 42℃水浴 30 分鐘。

    4. 向上步得到的樣品中,加入 220 μl 配制好的  CT  Conversion  Reagent 溶液,混勻,80℃恒溫水浴鍋中避光孵育 60分鐘。

     

    5. 向上步溶液中加入 480 μl M- Buffer PA,溫和上下顛倒混勻。

    6. 柱平衡:向已裝入收集管(Collection Tube)的吸附柱(Spin Column CS)中加入 200  μl Buffer PS,12,000 rpm~13,400×g)離心 2 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    7. 將步驟 5 所得溶液全部加入到吸附柱(已裝入收集管)中,室溫放置 2 分鐘,12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

     

       注意:吸附柱最大容量為700  μl,若樣品體積大于700 μl可分批加入  。

     

    8. 向吸附柱中加入 500 μl M- Buffer PA,12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,  將吸附柱放回收集管中。

    9. 向吸附柱中加入 650 μl  M-Wash Buffer(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

     

    10. 12,000 rpm 離心 2 分鐘,倒掉廢液,將吸附柱置于室溫數分鐘,以徹底晾干。

     

       注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)

     

    11. 將吸附柱放入一個新的離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加 20 μl M-Elution BufferpH  8.5),室溫放置 2 分鐘。12,000 rpm 離心 1 分鐘收集 DNA 溶液。

     

    12. 向收集的 20 μl DNA 中加入 2.2  μl M-Dilution Buffer,室溫靜止 30 分鐘。

    13. 向溶液中加入 500 μl 預冷的無水乙醇顛倒混勻,沉淀 30 分鐘(建議置于-20℃沉淀,過夜沉淀效果更好)。

    14. 12,000 rpm 離心 15 分鐘,輕輕倒掉上清,再用 75%乙醇洗滌一次。

     

    15. 12,000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉上清,室溫下待乙醇揮發后,加入 20 μl M-Elution Buffer 溶解,DNA 置于-20℃保存。此步收集的 DNA 可以用于后續相關實驗。

     

    實驗代做服務:

     

     

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